R&D Systems' RANKL 蛋白介紹

RANKL:

更正：R&D RANKL蛋白氨基酸長度為182個，不是之前所說245個。

別名：“腫瘤壞死因子配體超家族成員11”（tumor necrosis factor ligand superfamily member 11，TNFSF11）、“腫瘤壞死因子相關誘導細胞因子”（TNF-related activation-induced cytokine，TRANCE）、“蝕骨細胞抑制因子配體”（osteoprotegerin ligand，OPGL）或蝕骨細胞分化因子（osteoclast differentiation factor，ODF）。

結構：RANKL是腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）超家族的一員，為破骨細胞抑制因子（osteoprotegerin）的配體，他是造骨細胞（osteoblast）膜上的一種膜蛋白，屬于一種Ⅱ型跨膜蛋白。The human RANK Ligand cDNA encodes a type II transmembrane protein of 317 amino acids with a predicted cytoplasmic domain of 47 amino acids, a 21 amino acids transmembrane region, and an extracellular domain of 249 amino acids. 

作用機理：

A.      成骨細胞及骨髓基質細胞表達的RANKL與破骨細胞前體細胞或破骨細胞表面上的RANK結合，RANK膜內區有3個結合位點，與TNFR相關因子(TNF receptor associate factors, TRAFs)中的RAF1、2、3、5及6結合后，可激活轉錄因子NF-kB和蛋白激酶JNK，從而促進破骨細胞的分化及骨吸收活性。

B.       OPG（骨保護素）作為一種誘騙受體，可以競爭性的與RANKL結合，從而封閉RANKL與破骨細胞表面的RANK結合，抑制破骨細胞的分化成熟。

C.       RANKL/RANK與RANKL/OPG在生物體內保持著一定的比率,如果比率失衡,就會引起各種骨疾病。RANKL/RANK與RANKL/OPG系統將骨代謝、免疫系統和內分泌系統緊密的聯系起來，為骨質疏松、類風濕關節炎、骨腫瘤及腫瘤的骨轉移等骨破壞性疾病的治療開辟了新的途徑。

RANKL作用：

A.      可以增強成熟蝕骨細胞的活力，阻止破骨細胞凋亡，RANKL過表達，可導致一系列骨疾病，如風濕性關節炎，銀屑病性關節炎。實驗發現，將TNFSF基因剔除掉的老鼠，會導致嚴重的骨質石化癥（Osteopetrosis），且會缺乏蝕骨細胞

B.       免疫上，RANKL被視為是樹突細胞的存活因子。RANKL可阻止樹突細胞凋亡，促進T淋巴細胞增殖，且在淋巴細胞的早期發育和淋巴結的器官發育中發揮決定性的作用，這些作用可被OPG阻斷。這些都提示OPG/RANK/RANKL系統可能是聯系骨代謝與免疫系統之間的橋梁。

C.      RANKL也可能具有調節細胞凋亡的功能。RANKL還可以透過與“SRC激酶”（SRC kinase），以及“腫瘤壞死因子受體相關因子6”（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6）形成信息復合物，以致活AKT/PKB等細胞凋亡抑制激酶。

應用：

A.      骨代謝方面，如骨質疏松癥，風濕性關節炎等相關。

B.       免疫相關

C.       癌癥

RANKL蛋白因子使用方法：

在使用貨號為390-TN-010的RANKL蛋白誘導細胞分化時，培養基中需同時加入抗His-tag標簽抗體：Mouse Anti-polyHistidine Monoclonal Antibody (Catalog # MAB050)。只有此抗體存在時RANKL配體才能形成聚合體，進一步發揮功能

競爭分析：R&D VS PEPROTECH

R&D

Recombinant Human RANCE/TNFSF11/RANK L

Source:Mouse myeloma cell line, NS0-derived

Accession #:AAC51762

N-terminal Sequence Analysis:Met

Purity:>90%, by SDS-PAGE under reducing conditions and visualized by silver stain.

Predicted Molecular Mass:23 kDa

SDS-PAGE:35 kDa, reducing conditions

Activity:Measured by its ability to induce osteoclast differentiation of RAW 264.7 mouse monocyte/macrophage cells.The ED50 for this effect is typically 1.5-7.5 ng/mL in the presence of 2.5 μg/mL of a cross-linking antibody,

Protein Construct:

AA Sequence:182aa 

65 qhira ekamvdgswl dlakrsklea qpfahltina tdipsgshkv slsswyhdrg

      121 wgkisnmtfs ngklivnqdg fyylyanicf rhhetsgdla teylqlmvyv tktsikipss

      181 htlmkggstk ywsgnsefhf ysinvggffk lrsgeeisie vsnpslldpd qdatyfgafk

      241 vrdid

Peprotech

Catalog Number:  310-01price：2340

 20.0 kDa polypeptide comprising the TNF homologous region of RANKL (176 amino acid residues).

AA Sequence:  176aa

MEKAMVDGSW LDLAKRSKLE AQPFAHLTIN ATDIPSGSHK VSLSSWYHDR GWAKISNMTF SNGKLIVNQD GFYYLYANIC FRHHETSGDL ATEYLQLMVY VTKTSIKIPS SHTLMKGGST KYWSGNSEFH FYSINVGGFF KLRSGEEISI EVSNPSLLDP DQDATYFGAF KVRDID

Biological Activity:

Determined by its ability to induce NFkappaB in RAW264.7 cells in the absence of any cross-linking. The expected ED₅₀ for this effect is 10.0-25.0 ng/ml

R&D優勢：

*RANKL與其受體RANK以六聚體的形式結合并將信號傳遞至NF-κB，若無His-Tag標簽，RANKL不能聚合成聚合體的結構而發揮功能。

延伸：

許多激素和細胞因子參與調節RANKL的表達。IL-1、IL-17、1,25(OH)2D3、PTH、糖皮質激素和PGE2都可促進RANKL的表達，而TGF-B則抑制其表達。體外實驗證實，RANKL和M-CSF可取代OB/ST誘導多能破骨祖細胞分化成熟。

Mouse Anti-polyHistidine Monoclonal Antibody (Catalog # MAB050)